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摘要
为研究太子参参须多糖(RPFRP)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用及作用机制，本研究利用MTT法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的增殖情况，筛选出RPFRP的适宜浓度为25μg/mL～400μg/m L。将25μg/mL～400μg/m L RPFRP作用于RAW264.7细胞并于不同时间后收获细胞培养物或上清液进行后续试验。采用中性红法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的吞噬活性，结果显示：RPFRP可极显著提高RAW264.7细胞吞噬活性(P<0.01)，且该吞噬活性在PRFRP浓度为25μg/mL～200μg/mL时呈剂量依赖式升高；Griess法检测RAW264.7细胞的NO产生量，结果显示：RAW264.7细胞上清液中NO含量显著升高(P<0.05)，且呈RPFRP剂量依赖式升高；ELISA法检测RAW264.7细胞的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，结果显示：与空白对照组相比，RPFRP处理的RAW264.7细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量极显著或显著上升(P<0.01、P<0.05)，且在RPFRP浓度为25μg/mL～200μg/m L时呈剂量依赖式升高；q RT-PCR检测RAW264.7细胞的诱导型-氧化氮合酶(iNOS)、细胞因子、核转录因子-κB(NF-κB)、髓样分化因子88(MyD88)和Toll样受体4(TLR4) m RNA转录水平，结果显示：RPFRP处理的RAW264.7细胞中i NOS、IL-6、IL-10、TNF-α的m RNA转录水平均呈剂量依赖式增加(P<0.01),IL-1β、My D88和NF-κB的m RNA转录水平在RPFRP浓度为25μg/mL～200μg/m L时呈剂量依赖式升高(P<0.01)，仅在RPFRP浓度为400μg/m L时有所降低，而TLR4 m RNA的转录水平则呈剂量依赖式降低(P<0.01);western blot检测RAW264.7细胞中TLR2、TLR4、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、My D88、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)、NF-κB蛋白中表达水平，结果显示：RPFRP处理的RAW264.7细胞中TLR2、My D88、TRIF与胞核NF-κB蛋白的表达水平提高且在RPFRP浓度为50μg/m L～200μg/m L时呈剂量依赖式升高，而该细胞中TLR4、IκB-α和胞浆NF-κB蛋白的表达水平则在RPFRP浓度为50μg/mL～200μg/m L时呈剂量依赖式下降。综上可知，RPFRP可通过提高RAW264.7细胞的增殖能力、吞噬活性、分泌NO和细胞因子的能力等增强RAW264.7细胞的免疫功能，且RPFRP对RAW264.7细胞的免疫调控机制可能是通过TLR2/4-MyD88/TRIF-NF-κB信号通路活化RAW264.7细胞来完成。
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