PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T多态性评价

作者：何学虎; 郭雅琪; 梁小燕; 张玉英; 赵倩颖; 董洁; 贾伟

来源：中国妇幼保健, 2019, 34(01): 130-134.

• PCR-金磁微粒层析法
• MTHFR基因
• 多态性
• 评价

目的探讨PCR-金磁微粒层析法检测MTHFR基因C677T多态性进行方法学评价和性能确认,为个性化叶酸补充剂量提供参考依据。方法从检测下限、准确性、抗干扰能力、稳定性方面进行评价和确认。检测下限:分别选取MTHFR基因C677T野生型(677CC)、杂合突变型(677CT)和纯合突变型(677TT)外周血样本,提取基因组DNA,A260/A280在1. 65～1. 95之间,定量并稀释至2. 5 ng/μl、5 ng/μl、10 ng/μl三个浓度,每种基因型各浓度一式三份,然后进行PCR-金磁微粒层析法检测,统计三种基因型各浓度样本的检出率。准确性:将992例PCR-金磁微粒层析法检测的样本,提取基因组DNA,送第三方检测机构进行Sanger测序验证,比较二者的一致性。抗干扰能力:取三种基因型的外周血样本,分别加入终浓度为10 mg/ml的血红蛋白(Hb)、0. 2 mg/ml的胆红素(BIL)和5 mg/ml三酰甘油(TG),然后与不加任何干扰物质的样本同时进行检测,比较干扰组与正常组的检出情况。稳定性:取三种基因型的样本各1例,每种基因型各一式十份做平行检测,比较各基因型的检出情况。结果 (1)三种基因型在2. 5 ng/μl浓度水平均没有被检出,而在5 ng/μl和10 ng/μl浓度水平一式三份全部被检出,灵敏度为5 ng/μl。(2)992例样本的测序结果与PCR-金磁微粒层析法的检出结果完全一致,准确性100%。(3)三种基因型加干扰物的检出结果与不加干扰物的检出结果完全一致,抗干扰能力强。(4)三种基因型样本各1例平行检测10次的结果高度一致,稳定性高。结论 PCR-金磁微粒层析法可有效用于MTHFR基因C677T多态性检测,该法具有灵敏度高、准确性高、抗干扰能力强、稳定性高等特点,且无需特殊大型设备,具有快速、便捷、准确、经济等优势,适合在各级医疗机构开展。

• 单位
  宁夏医科大学总医院