高表达FcεR1α和共表达NPY-EGFP的RBL细胞系构建及生物学功能检测

作者：黄伦辉; 张嘉懿; 李柳栩; 张蓓; 刘运德; 李会强^*

来源：现代免疫学, 2021, 41(02): 89-93.

• 细胞系
• 高亲和力IgE受体α链
• 神经肽Y-增强型绿色荧光蛋白
• 特异性IgE

为构建一种高表达高亲和力IgE受体α链(high affinity IgE receptor alpha chain, FcεR1α)和共表达新型标志物神经肽Y(neuropeptide Y, NPY)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的RBL-2H3细胞模型并鉴定其活性,设计FcεR1α-NPY-EGFP序列,构建表达载体pLV-Puro-FcεR1α-T2A-NPY-EGFP-TYK2,对其进行测序鉴定后无内毒素大量提取;经脂质体Lipo2000瞬时转染,于48 h后通过荧光定量PCR、Western blotting、FACS鉴定FcεR1α表达水平;通过传统β-氨基己糖苷酶介质释放试验检测受体的活性,通过NPY-EGFP释放试验检测新型指标的功能。经基因水平、蛋白质水平、膜蛋白表达及功能试验鉴定FcεR1α位于RBL-2H3细胞膜上并有结合人特异性IgE(specific IgE, sIgE)的活性,新型标志物NPY-EGFP可以受刺激分泌。该研究成功构建了一种高表达FcεR1α和共表达新型标志物NPY-EGFP的细胞模型用于检测人血清sIgE。

• 单位
  天津医科大学; 天津市儿童医院; 中国医学科学院血液病医院; 中国医学科学院血液学研究所; 实验血液学国家重点实验室