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摘要
本研究旨在探讨嗜酸乳杆菌对氧化应激仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)抗氧化能力及紧密连接蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)和闭合蛋白(claudin)蛋白表达的影响。首先将IPEC-J2分为9组,分别加入0(对照)、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8和2.0 mmol/L的过氧化氢(H2O2),每组6个复孔,根据细胞活力确定最佳H2O2浓度。然后根据结果选择1.2 mmol/L的H2O2建立氧化应激IPEC-J2模型,将细胞分为7组,分别加入为0(对照)、1.0×105、1.0×106、1.0×107、1.0×108、1.0×109和1.0×1010CFU/mL嗜酸乳杆菌,每组6个复孔,处理时间为24 h,分析嗜酸乳杆菌对氧化应激IPEC-J2抗氧化能力。最后选择1.2 mmol/L的H2O2建立氧化应激IPEC-J2模型,加入1.0×109CFU/mL嗜酸乳杆菌继续培养24 h,将细胞分为4组,分别是对照组(添加等量的磷酸盐缓冲液)、H2O2氧化应激组、嗜酸乳杆菌组、嗜酸乳杆菌组+H2O2组(先加入H2O2后加入嗜酸乳杆菌),每组6个重复,测定ZO-1、occludin和claudin蛋白的表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度高于0.6 mmol/L时,细胞活力显著降低(P<0.05)。与对照组和0.6～1.0 mmol/L H2O2组相比,当H2O2浓度处于1.2～1.8 mmol/L时,细胞活力显著下降(P<0.05)。2)与对照组相比,当嗜酸乳杆菌浓度高于1.0×108CFU/mL时,细胞活力显著提高(P<0.05)。3)在氧化应激条件下,随着嗜酸乳杆菌浓度的增加,细胞活力逐渐上升。与对照组相比,当嗜酸乳杆菌浓度低于1.0×107CFU/mL时,细胞活力显著降低(P<0.05),当嗜酸乳杆菌浓度高于1.0×109CFU/mL时,细胞活力显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,当嗜酸乳杆菌浓度高于1.0×106CFU/mL时,细胞中丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),嗜酸乳杆菌浓度高于1.0×107CFU/mL时,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著上升(P<0.05),其他各组中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性较对照组显著升高(P<0.05)。5)与H2O2氧化应激组相比,嗜酸乳杆菌组和嗜酸乳杆菌+H2O2组中细胞浆内ZO-1和occludin蛋白表达量显著降低(P<0.05);与对照组和H2O2氧化应激组相比,嗜酸乳杆菌组和嗜酸乳杆菌+H2O2组中claudin蛋白表达量显著降低(P<0.05)。由此可知,嗜酸乳杆菌能够促进细胞的生长,增强细胞的抗氧化能力,降低胞浆内紧密连接蛋白的表达量。
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