含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定

作者：陈漉; 金宁一; 李霄; 刘立明; 贾鹏; 刘妍; 高鹏; 陆蕴松; 李明; 迟宝荣

来源：中国免疫学杂志, 2009, 25(02): 132-135.

• NDV
• HN基因
• 重组腺病毒
• 抗肿瘤

目的:构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)基因的重组腺病毒,为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切质粒pVHN,将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA,构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacⅠ单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度。结果:所构建重组病毒可有效表达HN基因,表达产物分子量约为63kD,重组病毒滴度为108~1010PFU/ml。结论:成功构建含HN基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。

• 单位
  军事医学科学院; 通化市中心医院; 人民医院血液科; 吉林大学; 吉林大学第一医院