m6A识别蛋白HuR调控lncRNA TRG-AS1抑制结直肠癌生长的机制研究

作者：柴小兵; 张利; 褚菲菲; 吴慧丽^*

来源：天津医药, 2023, 51(02): 124-131.

• 结直肠肿瘤
• 甲基化
• RNA,长链非编码
• 细胞增殖
• 人类抗原R
• N6-甲基腺苷
• T细胞受体γ位点反义RNA 1

目的 探讨N6-甲基腺苷（m6A）识别蛋白人类抗原R(HuR)调控长链非编码RNA T细胞受体γ位点反义RNA 1(lncRNA TRG-AS1)对结直肠癌（CRC）生长的影响。方法 比色法检测CRC患者的癌组织、癌旁组织及正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞HCT116、SW480、LOVO中m6A含量；实时荧光定量PCR(qPCR)检测TRG-AS1表达；Western blot检测HuR蛋白表达。将HCT116细胞分为Ct组、OE-NC组、OE-HuR组、si-NC组、si-HuR组、siHuR+pcDNA组、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组，CCK-8法检测细胞增殖；平板克隆实验检测细胞克隆形成能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；划痕愈合实验检测细胞迁移；Transwell检测细胞侵袭；裸鼠体内移植瘤实验观察肿瘤生长情况；采用甲基化RNA免疫共沉淀（MeRIP）检测TRG-AS1上是否存在m6A位点；RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀（RIP）检测TRG-AS1与HuR蛋白的相互作用。结果 在CRC组织和细胞中，HuR蛋白、TRG-AS1高表达，m6A含量降低，且在HCT116细胞中HuR蛋白、TRG-AS1表达最高，m6A含量最低（P<0.05），选择HCT116细胞为研究对象。与si-NC组比较，si-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达降低，m6A含量升高（P<0.05）；与OE-NC组比较，OE-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达升高，m6A含量降低（P<0.05）；与si-HuR组、si-HuR+pcDNA组比较，si-HuR+pcDNATRG-AS1组HuR蛋白、m6A含量变化差异无统计学意义，TRG-AS1表达升高（P<0.05）；下调HuR可抑制HCT116细胞增殖、迁移、侵袭及体内移植瘤的生长，促进细胞凋亡，而上调HuR则呈相反趋势；过表达TRG-AS1减弱了沉默HuR对HCT116细胞增殖、划痕愈合率、侵袭、体内移植瘤生长的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用；TRG-AS1上存在m6A位点，且TRG-AS1能与HuR蛋白相互作用。结论 沉默m6A识别蛋白HuR可通过抑制TRG-AS1表达进而抑制HCT116细胞增殖、迁移与侵袭，促进细胞凋亡。

• 单位
  郑州大学