非洲猪瘟病毒荧光PCR检测方法的建立及评价

作者：陈小金; 朱向东; 李文钢; 赵丹; 张俊哲; 李秀梅; 董志珍^*; 张霞^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(07): 815-823.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0132

• 非洲猪瘟病毒
• 荧光PCR
• 方法评价

为建立非洲猪瘟病毒（ASFV）荧光PCR方法并研制配套检测试剂，本研究以非洲猪瘟病毒E183L基因为靶基因，运用TaqMan探针法建立检测方法，并对其进行验证评价。根据E183L基因序列设计特异性引物和探针，将目的片段克隆到pBackZero-T载体，并转化至大肠杆菌JM109中制备标准品，并绘制标准曲线。同时对本方法的灵敏度、特异性、重复性和实际样品检测效果进行评价，并由WOAH非洲猪瘟参考实验室对该方法和试剂进行验证。结果显示，本研究以3.3×10~7～3.3×10~1copies/μL浓度范围内的质粒为标准品建立标准曲线；所建立的方法与其他几种常见猪病病毒无交叉反应；最低检测下限为3.3 copies/μL；批内和批间变异系数均小于2%；对WOAH参考实验室阳性样品的评估试验表明，本研究建立的方法与参考实验室推荐方法的符合率为93.8%。运用该方法检测国内猪场、无害化处理厂、屠宰厂和市售样品34 350份，检出环境阳性81份，检出率略高于WOAH推荐方法。上述结果表明，本试验所建立的方法适用于血液、拭子、猪肉制品以及环境样品中ASFV检测和猪场监控检测，可作为ASFV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。

• 单位
  天津市动物疫病预防控制中心; 韶关学院