Raf激酶抑制蛋白对恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移的影响及其机制

作者：周凯; 张颖异; 岑瑛; 朱国念; 张艳阁^*

来源：中华医学杂志, 2019, 99(08): 616-621.

• 黑色素瘤
• Raf激酶类
• 细胞增殖
• 细胞运动
• NF-κB

目的探讨Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在体外对恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移能力的影响及其机制。方法利用重组慢病毒转染技术构建小鼠恶性黑色素瘤细胞株B16的RKIP过表达及调低的稳定转染株, 并将其设立为RKIP过表达组和RKIP调低组, 以未经任何处理的小鼠恶性黑色素瘤B16细胞为空白对照组;通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)法与细胞划痕实验检测各组细胞的增殖活性及迁移能力, 利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、钙离子依赖的细胞黏附素、Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、MMP-2及磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(PEBP-1)的相对表达量;Western印迹检测各组细胞间RKIP表达差异及其在核因子(NF)-κB信号通路的蛋白相对表达量。结果 RKIP过表达组细胞增殖率显著低于空白对照组(0.794±0.038比1.200±0.081)(P<0.001), 而RKIP调低组细胞的增殖率与空白对照组差异无统计学意义(1.077±0.084比1.200±0.081)(P>0.05);RKIP过表达组细胞的迁移能力显著低于空白对照组(P<0.001), 而RKIP调低组细胞的迁移能力显著高于空白对照组(P<0.001);除RKIP调低组与空白对照组PEBP-1相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)外, 其余检测基因相对表达量在RKIP过表达组均显著低于空白对照组, RKIP调低组均显著高于空白对照组(均P<0.001)。RKIP过表达组中磷酸化的P65(p-P65)蛋白相对表达量显著低于空白对照组(0.080±0.000比0.236±0.000), 而RKIP调低组中p-P65蛋白相对表达量则显著高于空白对照组(1.139±0.001比0.236±0.000)(均P<0.001)。结论 RKIP过表达可以抑制恶性黑色素瘤细胞的增殖及迁移, 其可能与调控NF-κB信号通路相关蛋白P65的磷酸化有关。

• 单位
  四川大学华西医院