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摘要
目目的的：研究小檗碱（BBR）对血管紧张素数增长期的ANA-1细胞按照Ⅱ（Ang随机数字Ⅱ）诱导ANA-1细胞的炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法：对表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组等7组。对照组、荧光抗体组均在皿中加入2.5mol/L的AngμL的二甲基亚砜（DMSO）；模型组皿中加入浓度为1抑制μ剂组皿中加入Ⅱ工作液；低、中、高剂量BBR组分别在皿中加入浓度为1、5、10μmol/L的BBR工作液；浓度为10的BBR对细胞活力μmol/L的TAK242工作液。采用细胞增殖与毒性检测实验（CCK-8）方法检测不同浓度的影响；采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度（MFI）；采用ELISA法检测白细胞介素-1死因子--1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏α（TNF-α）的含量；采用实时定量PCR法检测IL-JNK/JNK、p-p65/p65、pβ、IL-6、TNF--IRF3/IRF3的αmRNA水平；采用Western Blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、p磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况；采用生化法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果：剂量BBR组细胞活性均无明显区别，差异无统计学意义（1）CCK-8法检测结果：与对照组比较，低、中、高（P>0.05）。（2）流式细胞术检测结果：与荧光抗体组比，模型组MFI明显减弱；与模型组比较，模型+高剂量BBR组MFI明显增强，差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）ELISA检测结果：与对照组比较，模型组IL-1BR组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高；与模型组比较，模型组+低、中、高剂量B测结果：与对照组β、IL-6、TNF-比较，模型组αI含量均明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）实时定量PCR法检L-1模型组比较，模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1-6、TNF-β、IL-6、TNF-mRNA水平明显升高；与α（P<0.05）。β、IL较，模型组干预αmRNA水平均明显降低，差异具有统计学意义（5）Western Blot结果：与对照组比45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达显著上调，模型+低、中、高剂量BBR组p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显下调。与对照组比较，模型组干预15 min后ERK、p38蛋白磷酸化表达显著上调，干预30 min后JNK蛋白的磷酸化表达显著上调，干预45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达显著上调，而模型+高剂量BBR组与模型+抑制组p65、IRF-3、ERK、p38、JNK蛋白的磷酸化表达均显著下调。与对照组比较，模型组干预12 h后TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达显著上调，模型+低、中、高剂量BBR组TLR4、MyD88、AP-1蛋白的表达以及p65、IκBα、JNK蛋白的磷酸化表达均显著下调。与对照组比较，模型组干预12 h后TLR4、p-p65的表达显著上调，而模型+高剂量BBR组、模型+抑制剂组、模型+抑制剂+高剂量BBR组的TLR4、p-p65蛋白的表达均显著下调。（6）生化检测结果：与对照组相比较，模型组的MDA含量显著上调，并且SOD活力显著下调，差异具有统计学意义（P<0.05），模型+低、中、高剂量BBR组MDA的含量显著下调，并且SOD活力显著上调，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：BBR能够通过抑制TLR4的内吞，从而抑制由AngⅡ诱导的TLR4信号通路的异常激活，进而抑制NF-，调控炎性应答，此外，BBR还能够改善AngκB和MAPK的信号转导，降低促炎因子的水平和含量伤，保护ANA-1细胞Ⅱ诱导的ANA-1细胞的脂质过氧化程度及抗氧化能力，降低AngⅡ造成的氧化应激损。
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