骨桥蛋白对巨噬细胞极化影响的体外实验研究

作者：冯丽华; 王敏; 夏海斌^*; 黄开耀

来源：口腔医学研究, 2019, 35(05): 497-501.

DOI：10.13701/j.cnki.kqyxyj.2019.05.020

• 骨桥蛋白
• 巨噬细胞
• M1型极化
• M2型极化

目的:探究外源性骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在体外对巨噬细胞极化为M1型或M2型的影响。方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,进行以下分组实验:(1)OPN浓度梯度实验:设定对照组,实验组加入不同浓度OPN(0.1、0.5、1.0 mg/L);(2)M1型极化实验:设定对照组、脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)组、OPN组、LPS+OPN组;(3)M2型极化实验:设定对照组、白细胞介素-4(interleukin-4, IL-4)组、OPN组、IL-4+OPN组。培养24 h后,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)分析M1型基因诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及M2型基因CD206、精氨酸酶-1(arginase-1, Arg-1)、白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)的mRNA表达;Western blot检测iNOS、Arg-1的蛋白表达;免疫荧光检测iNOS、CD206的表达。结果:qRT-PCR显示,与对照组比较,OPN组的M1型基因iNOS、TNF-α、IL-1β及M2型基因CD206、Arg-1、IL-10的mRNA表达均上调(P<0.05),并呈浓度依赖关系;LPS+OPN组的M1型基因表达上调最高,IL-4+OPN组的M2型基因表达上调最高(P<0.05);Western blot、免疫荧光与qRT-PCR结果一致。结论:OPN作为一种多效性细胞因子,可能促进巨噬细胞向M1型或M2型极化,并与极化诱导剂LPS和IL-4具有潜在的协同促进作用。

• 单位
  中国科学院水生生物研究所; 武汉大学口腔医院