犬弓首蛔虫黏蛋白2的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：贾红菓; 谭纯; 王冰楠; 梅四鹏; 孙雪; 杨晓伟; 周荣琼

来源：西南大学学报(自然科学版), 2023, 45(01): 66-73.

DOI：10.13718/j.cnki.xdzk.2023.01.007

• 犬弓首蛔虫
• 黏蛋白2
• 克隆
• 原核表达
• 多克隆抗体

根据犬弓首蛔虫(Toxocara canis)黏蛋白2的基因组数据(GenBank:AF167707),以T.canis成虫的基因组DNA为模板扩增Tc-muc-2基因并进行序列分析；同时构建Tc-muc-2/pCold TF原核表达载体，采用ITPG诱导表达，对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-muc-2基因全长序列为549 bp,共编码183个氨基酸；多重序列比对发现犬弓首蛔虫的黏蛋白均具有SKhT保守结构域，且含有不同串联重复序列组成的黏蛋白结构域；种系发育分析结果显示与猪蛔虫进化关系较近；SDS-PAGE结果表明重组蛋白Tc-MUC-2相对分子质量为7.5×10～4,以可溶性形式表达；利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白，以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度目的蛋白；将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体，间接ELISA结果显示其多克隆抗体效价大于1∶512 000,表明重组蛋白的免疫原性较好，SDS-PAGE结果显示纯化后的抗体纯度高于95%, Western Blot结果显示抗体能与Tc-MUC-2蛋白特异性结合，表明抗体特异性高.

• 单位
  西南大学