翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶基因的分子克隆与原核表达

作者：程周玉; 许亮清; 胡向萍; 胡宝庆; 简少卿; 阳刚; 张明; 文春根; 宁瑞红; 王鹤

来源：南昌大学学报(理科版), 2015, 39(06): 587-596.

DOI：10.13764/j.cnki.ncdl.2015.06.015

• 翘嘴鳜
• 超氧化物歧化酶
• 基因克隆
• 原核表达

运用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)铜锌超氧化物歧化酶(命名为ScCu/Zn-SOD)基因,该基因的cDNA序列全长为804bp,开放阅读框为465bp,编码154个氨基酸。氨基酸序列中含2个Cu/Zn-SOD标签序列、7个铜锌金属结合位点、2个半胱氨酸位点和1个N-糖基化位点;其与胞内Cu/Zn-SOD(icCu/Zn-SOD)和胞外Cu/Zn-SOD(ecCu/Zn-SOD)氨基酸序列的同源性分别为60.13%92.21%和33.77%42.21%。在系统进化树中,ScCu/Zn-SOD与其它物种的icCu/Zn-SOD聚成一支。ScCu/Zn-SOD的蛋白晶体结构主要由2个α螺旋和8个β折叠组成,呈β折叠构象,通过结合1个Cu2+和1个Zn2+构成其酶活性中心。ScCu/Zn-SOD的mRNA在翘嘴鳜肌肉、鳃、肝脏和肾脏等组织中均有表达,且鳃中的相对表达量最高。将该基因编码蛋白序列与pET-30a表达载体重组,热激转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测发现诱导后菌液的超声上清中有可溶性重组蛋白表达。

• 单位
  江西生物科技职业学院; 南昌市农科院畜牧水产研究所; 南昌大学; 生命科学学院