Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定

作者：孙筱品; 董玉梅; 汪海燕; 谌容; 桂飞; 宋晓明; 汪朦; 杨怡; 谭晓华; 洪玉; 宋杨; 黄瑾; 杨磊

来源：动物医学进展, 2019, 40(4): 16-21.

DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2019.04.003

• Neuritin
• 载体构建
• 基因打靶
• 胚胎干细胞

Neuritin(Nrn1)是神经营养因子家族的成员,能够维持神经元的存活和突起的生长,在神经系统发育和再生中起重要作用.为了解Neuritin基因在整体动物水平的系统生物学功能,通过PCR扩增Neuritin基因片段,将该片段用In-fusion无缝克隆技术连接至用限制性内切酶A sc1酶切后线性化的CTV-IRES-EGFP质粒,转化至Stellar感受态细胞后,对酶切和测序鉴定正确的阳性克隆子进行大量提取质粒,酶切使之线性化后将其电转导入小鼠胚胎干细胞细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,用PCR方法鉴定出同源重组的ES细胞DNA.结果表明,成功构建了CTV-Nrn1-IRES-EGFP基因打靶载体载体并筛选出阳性同源重组胚胎干细胞,为制备Neuritin条件性基因打靶小鼠模型奠定了实验基础.

• 单位
  杭州师范大学; 石河子大学