猪源多聚免疫球蛋白受体的表达及抗血清的制备

作者：邹抒洁; 付钰广; 张韬; 黄鑫; 王金泉^*; 刘光亮^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(01): 70-76.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0018

• pIgR
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了制备猪源pIgR蛋白的多克隆抗体,分析NCBI提供的猪源pIgR的胞外区基因序列并设计引物,经过PCR、酶切、连接,将目的序列克隆入原核表达载体pET-30a(+),测序验证成功后,将带有目的片段的重组质粒转化入大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析的方法获得了较为纯净的pIgR蛋白。用纯化后的pIgR与佐剂混合后免疫日本大白耳兔,制备兔源的多克隆抗体。结果显示,本研究正确构建了带有pIgR基因的重组质粒,并成功表达pIgR蛋白,预测的分子质量约为82 ku;ELISA测定结果显示,pIgR蛋白免疫日本大白耳兔获得的多克隆抗体效价高,且在稀释至1∶3 200时依然具有良好的反应性;Western-blot和IFA检测结果显示,制备的pIgR多克隆抗体特异性高、敏感性好。结果表明,本次研究为后续深入探索猪机体黏膜免疫过程中pIgR相关的分子机制奠定了基础,为后期制备猪源p Ig R的单克隆抗体提供了前期的物质准备。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 新疆农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所