微小RNA-618通过靶向羧基末端结合蛋白2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

作者：姜雪毅; 陈炎坤; 刘欣原; 潘燕妮; 江建新^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(01): 10-13.

• 胰腺癌
• 微小RNA
• 增殖
• 侵袭
• 迁移

目的探讨微小RNA(miR)-618及羧基末端结合蛋白2(CtBP2)对胰腺癌增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中miR-618的表达;分别转染miR-618 inhibitor和mimics后, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆集落形成及Transwell实验检测miR-618对胰腺癌MIA PaCa-2和SW1990细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;运用在线数据库预测能够与miR-618结合的靶基因;RT-qPCR检测转染miR-618 inhibitor和mimics后相关靶基因的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-618 inhibitor组和mimics组中CtBP2的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测miR-618和CtBP2的靶向结合情况;CCK-8、克隆形成和Transwell实验检测同时转染si-CtBP2和miR-618 inhibitor较单独转染si-CtBP2后对胰腺癌增殖及侵袭迁移的影响。组间比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验。结果 BxPC-3(0.65±0.01)、MIA PaCa-2(0.45±0.07)、PANC-1(0.51±0.04)和SW1990(0.53±0.01)中miR-618的表达量低于正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)(1.01±0.13, t=4.371、8.859、6.794、6.171, P<0.01), 差异有统计学意义;干扰miR-618的表达后可显著促进胰腺癌MIA PaCa-2和SW1990的增殖、侵袭及迁移能力;同时在线数据库预测miR-618的潜在靶基因, 结合RT-qPCR验证转染mimics和inhibitor后各候选基因的表达, 结果提示仅有CtBP2与miR-618的表达呈负相关;进一步Western blot结果显示, 转染miR-618 mimics后MIA PaCa-2(0.32±0.06)和SW1990(0.45±0.03)中CtBP2的表达量低于对照组(1.02±0.05和0.99±0.05, t=9.850、10.087, P<0.01), 差异有统计学意义;双荧光素酶报告结果显示miR-618与CtBP2靶向结合(t=6.573, P<0.05), 差异有统计学意义;功能回复实验结果显示共转染miR-618 inhibitor及si-CtBP2组可逆转单独干扰CtBP2后对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论 miR-618靶向CtBP2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移。

• 单位
  贵州医科大学