CircSAFB2通过微小RNA-1301-3p/zeste基因增强子同源物2对骨肉瘤细胞凋亡和侵袭的作用

作者：李劲峰; 时利军; 苏会芳; 冷子宽; 陈松峰; 尚国伟; 王义生; 刘宏建^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(12).

• 骨肉瘤细胞
• 环状RNA
• 细胞凋亡
• 细胞侵袭

目的观察circSAFB2通过微小RNA(miR)-1301-3p/zeste基因增强子同源物2(EZH2)对骨肉瘤细胞凋亡和侵袭的影响。方法选用骨肉瘤细胞株MG63, 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测MG63细胞和正常成骨细胞中circSAFB2、miR-1301-3p和EZH2 mRNA的表达。将circSAFB2小干扰RNA(siRNA)慢病毒感染骨肉瘤细胞, 用流式细胞术检测细胞凋亡率, Transwell检测细胞侵袭能力。培养HEK293细胞, 将miR-1301-3p mimic和miR-NC分别与野生型circSAFB2 (Wt)或突变型circSAFB2 (Mut)重组报告基因质粒共转染, 将miR-1301-3p mimic和miR-NC分别与野生型EZH2 3’端非编码区(3’UTR)(Wt)或突变型EZH2 3’UTR(Mut)重组报告基因质粒共转染, 使用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中上调miR-1301-3p表达后EZH2表达水平的变化。最后分别转染circSAFB2 siRNA、miR-1301-3p mimic、共转染circSAFB2 siRNA和pcDNA3.1-EZH2、共转染miR-1301-3p mimic和pcDNA3.1-EZH2, 通过流式细胞术、Transwel1分别检测各组细胞凋亡和侵袭能力。组间比较采用t检验。结果 RT-qPCR结果显示, 骨肉瘤细胞MG63中circSAFB2、EZH2 mRNA表达量高于正常成骨细胞(2.263±0.154比1.000±0.093、4.155±0.406比1.000±0.092, t=15.686、16.955, P<0. 05);miR-1301-3p表达量低于正常成骨细胞(0.333±0.031比1.000±0.120, t=12.095, P<0. 05)。感染circSAFB2 siRNA骨肉瘤细胞的凋亡率高于感染circSAFB-NC组和Blank组[(22.48±2.27)%比%(5.92±0.57)%、(5.61±0.62)%, F=142.710, P<0. 05], 侵袭数量低于感染circSAFB-NC组和Blank组[(49.333±7.024)比(112.667±14.978)、(110.667±14.048), F=24.767, P<0. 05]。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因检测进一步证实了CircSAFB2靶向miR-1301-3p, 同时EZH2是miR-1301-3p的靶基因。circSAFB2 siRNA和pcDNA3.1-EZH2共转染的凋亡率低于单独转染circSAFB2 siRNA组[(12.07±0.92)%比(19.58±2.13)%, F=51.211, P<0. 05], 侵袭数量高于单独转染circSAFB2 siRNA组[(77.333±12.741)比(47.667±7.506), F=13.595, P<0. 05]。miR-1301-3p mimic和pcDNA3.1-EZH2共转染的凋亡率低于单独转染miR-1301-3p mimic组[(14.07±1.42)%比(20.73±1.99)%, F=51.211, P<0. 05], 侵袭数量高于单独转染miR-1301-3p mimic组[(83.667±12.741)比(50.667±8.622), F=13.595, P<0. 05]。结论 circSAFB2通过miR-1301-3p/EZH2调控骨肉瘤细胞的凋亡和侵袭的作用。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室