人肝细胞生长因子基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

作者：徐宠俊; 何荷蕃; 林群^*; 章涛

来源：吉林大学学报(医学版), 2021, 47(01): 16-24.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20210103

• 慢病毒
• 肝细胞生长因子
• 骨髓间充质干细胞
• 神经病理性疼痛

目的:构建人肝细胞生长因子(HGF)基因慢病毒载体pNL-HGF-增强绿色荧光蛋白(EGFP)并转染骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测HGF基因在BMSCs中的表达。方法:采用基因重组技术,利用限制性内切酶酶切获取HGF基因序列并克隆到慢病毒载体pNL-EGFP上,构建重组慢病毒质粒pNL-HGF-EGFP;将慢病毒载体质粒pNL-EGFP和重组慢病毒质粒pNL-HGF-EGFP分别与慢病毒辅助包装质粒共转染人胚肾293T细胞,包装慢病毒并测定慢病毒滴度。将感染pNLEGFP的BMSCs作为对照组,感染pNL-HGF-EGFP的BMSCs作为实验组。RT-PCR法和ELISA法检测对照组和实验组BMSCs中HGF mRNA表达水平和蛋白水平。结果:酶切电泳和测序检测,重组慢病毒质粒的目的基因序列与GenBank公布的HGF基因序列完全一致。对照组包装的慢病毒滴度为1.2×107 TU·mL-1,实验组慢病毒滴度为1.5×106 TU·mL-1;RT-PCR法检测,实验组BMSCs中HGF mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05);ELIAS法检测,实验组BMSCs上清中HGF蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:成功构建了pNL-HGF-EGFP慢病毒载体,且BMSCs中HGF mRNA表达水平和蛋白水平明显升高。

• 单位
  福建医科大学附属第一医院; 福建医科大学附属第二医院; 福建医科大学