偏肺病毒逆转录实时荧光定量PCR的建立及应用

作者：周杰英; 林应标; 曹友德; 段招军

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2016, 30(02): 216-219.

• 逆转录实时荧光定量PCR
• 偏肺病毒

目的建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),并检测临床样本,了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点。方法针对保守基因F合成引物和探针,制备偏肺病毒转录RNA标准品并建立标准曲线,检测线性范围、最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。对采集自2010年12月至2011年11月兰州地区急性呼吸道疾病患儿的222份下呼吸道临床标本进行偏肺病毒筛查,同时对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查,并对偏肺病毒进行相关流行病学分析。结果方法线性检测范围是10-108拷贝/μl,最低检测限是10拷贝/μl,曲线相关系数是1,扩增效率是91.62%,Ct值组内CV值小于2%。以传统PCR产物的测序结果为参照,逆转录实时荧光定量PCR的敏感性和特异性分别是100%和96.17%。偏肺病毒检出22例(9.46%),其中男童13例(5.86%),女童8例(3.60%)。春、夏、秋、冬的检出率分别是15.71%、0%、5.08%、11.11%。偏肺病毒载量与混合感染、疾病种类、临床症状差异均无统计学意义。结论该方法是检测偏肺病毒灵敏度、特异性和重复性均较好的方法;偏肺病毒在兰州地区儿童呼吸道感染中占有重要地位,长期系统的监测具有重要意义。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 湖南省人民医院; 郴州市第一人民医院