慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响

作者：吴明; 肖永强; 刘名倬; 李郁葱; 李明利; 彭凌华; 冯永文; 朱峰

来源：广东医学, 2016, 37(16): 2377-2383.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.20160810.001

• 非肌肉肌球蛋白重链ⅡA
• 骨髓间充质细胞
• 慢病毒
• 旁分泌

目的观察慢病毒介导shRNA沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA(MYH9)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含MYH9干扰序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro(实验组)质粒转染到293T细胞,以转染pHBLV-U6-ZsGreen-Puro空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,包装产生的病毒液感染BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;以β-actin为内参,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测MYH9 mRNA及蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测其培养基上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、促血管生成素1(ANG-1)和促血管生成素2(ANG-2)的含量。结果成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和Western blot结果显示2条慢病毒感染MYH9 mRNA表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组(P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05)。结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响。

• 单位
  广东省深圳市第二人民医院重症医学科; 中国人民解放军第二军医大学; 长海医院; 江西省赣州市人民医院; 南昌大学第一附属医院