基于毛细管电泳-单链构象多态性技术的血液感染病原菌检测方法研究

作者：刘春江; 夏涵; 府伟灵; 黄君富; 袁慧欣; 李建珍

来源：中华医院感染学杂志, 2012, 22(20): 4445-4448.

• 毛细管电泳
• 单链构象多态性
• 血液感染
• 病原菌
• 检测

目的探讨建立一种基于毛细管电泳-单链构象多态性(CE-SSCP)技术的血液感染病原菌快速检测方法。方法选取常见血液感染病原菌,查询其基因组序列,在其保守区域设计通用引物进行PCR扩增,然后进行CE-SSCP分析,测定不同病原菌所对应的出峰时间及不同浓度的PCR产物所对应的峰面积;用标准菌株建立各菌的CE-SSCP特异图谱,用临床菌株进行验证;以大肠埃希菌为研究对象,挑取浓度为10～108 CFU/ml的菌液,研究该方法的最低检出浓度。结果所设计引物能够成功扩增所研究的6种病原菌,电泳中未见明显引物二聚体和非特性条带;CE-SSCP分析显示,6种菌的出峰时间各不相同,金黄色葡萄球菌为4082、大肠埃希菌为3999、铜绿假单胞菌为3958、表皮葡萄球菌为4063、肺炎克雷伯菌为3980、粪肠球菌为4166、肺炎链球菌为4055;不同浓度的PCR产物对应不同大小的峰面积,浓度>10ng/L是两者呈良好的线性关系;CE-SSCP法最低可检测18CFU/ml的菌液。结论利用CE-SSCP技术检测血液感染病原菌快速、灵敏,而且不受抗菌药物影响,尤其适合对难培养菌的检测,可以与传统方法互补。

• 单位
  第三军医大学第一附属医院; 武警山西省总队医院