Ddit4 3′UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建及调控microRNA的鉴定

作者：孙雨晴; 王宇飞; 宋美燕; 张娟; 张丽; 李美宁; 白云^*; 刘志贞^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(12): 1437-1442.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003488

• miR-222-3p
• Ddit4基因
• 3′UTR
• 双荧光素酶报告载体

目的构建Ddit4基因双荧光素酶报告基因质粒,并验证miR-222-3p与Ddit4的靶向调控关系。方法利用生物信息学软件预测miR-222-3p与Ddit4的结合位点;PCR扩增Ddit4 3′UTR序列,将其克隆至双荧光素酶GPmiRGLO报告基因载体中,同时构建Ddit4 3′UTR突变载体;将miR-222-3p、双荧光素酶报告质粒野生型和突变型mmu-Ddit4 3′UTR共转染至HT-22细胞中,酶标仪检测双荧光素酶荧光值。结果生物信息数据库预测结果显示,miR-222-3p与Ddit4基因3′UTR存在互补结合位点,载体测序证实双荧光素酶Ddit4报告载体构建成功;双荧光素酶试验表明,miR-222-3p mimics能够与野生型Ddit4基因3′UTR靶向结合并降低其荧光值,将靶位点进行突变后,其荧光值有所上升。结论 miR-222-3p与Ddit4基因3′UTR互补结合实现了其对Ddit4靶向调控的作用;miR-222-3p可能通过调控Ddit4进而参与NTDs的发生发展。

• 单位
  山西省妇幼保健院; 山西医科大学