多嘧啶序列结合蛋白1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

作者：刘咏博; 邵浩仁; 何沐; 郭佳^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(12).

• 前列腺癌
• 多嘧啶序列结合蛋白1
• 增殖
• 迁移
• 侵袭
• 上皮-间充质转化

目的检测多嘧啶序列结合蛋白1(PTBP1)在前列腺癌中的表达水平, 并探究PTBP1对前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法运用UALCAN数据库分析PTBP1基因在前列腺癌组织中的表达水平、PTBP1基因与前列腺癌患者总生存期(OS)的关系, 收集前列腺癌及癌旁组织, 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁组织、正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞中PTBP1 mRNA和蛋白质的相对表达水平。在前列腺癌PC3细胞中转染siRNA-PTBP1, 将细胞分为转染组(si-PTBP1)和对照组(NC), 采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率。利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)及EMT标志蛋白的表达水平;所有结果应用SPSS 26.0统计软件分析。结果 UALCAN数据库显示PTBP1基因在前列腺癌组织中表达水平升高(P<0.001), 患者总生存期(OS)与PTBP1表达水平呈负相关(P<0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明前列腺癌组织中PTBP1 mRNA和蛋白相对表达水平高于癌旁组织(mRNA:2.31±0.12比1.02±0.11, t=14.343, P<0.05;蛋白:101.00±9.54比42.33±8.50, t=7.951, P<0.05), PC3和DU145细胞中PTBP1相对表达水平高于正常前列腺上皮细胞(mRNA:7.13±0.09比1.02±0.13、4.31±0.11比1.02±0.13, t=66.578、33.310, P<0.05;蛋白:202.67±11.50比101.33±9.07、172.67±13.05比101.33±9.07, t=11.979、7.773, P<0.05);转染组细胞PTBP1 mRNA和蛋白相对表达水平低于对照组(mRNA:0.32±0.09比1.03±0.09, t=9.040, P<0.05;蛋白:43.33±11.50比104.33±11.06, t=6.621, P<0.05);细胞克隆形成实验结果表明转染组细胞克隆形成数目低于对照组[(81.33±11.50)个比(181.00±12.00)个, t=10.385, P<0.05];CCK-8实验中, 转染组细胞在48、72、96 h的增殖活性均低于对照组(48 h:0.40±0.09比0.62±0.11、72 h:0.63±0.11比1.01±0.09、96 h:0.85±0.11比1.65±0.09, t=2.076、4.692、9.549, P<0.05);Transwell迁移实验中, 转染组细胞迁移数目低于对照组[(43.33±11.50)个比(131.33±10.59)个, t=9.744, P<0.05], 侵袭实验中, 转染组细胞侵袭数目低于对照组[(36.00±10.54)个比(91.67±8.62)个, t=7.082, P<0.05];此外, Western blot实验结果表明转染组细胞β-catenin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达水平低于对照组(β-catenin:99.33±8.02比24.33±8.02, t=11.452, P<0.05;N-cadherin:101.67±8.50比21.33±7.51, t=12.267, P<0.05;Vimentin:102.67±8.50比20.00±10.15, t=10.813, P<0.05), 转染组细胞E-cadherin的蛋白表达水平高于对照组(100.67±7.51比189.33±8.50, t=13.539, P<0.05), 以上差异均有统计学意义。结论 PTBP1在前列腺癌组织和细胞中异常高表达, 可促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和EMT。

• 单位
  武汉大学人民医院