人GST-Cdc25C融合蛋白的原核表达、纯化及功能初步检测

作者：范忠义; 徐小洁; 曹佳; 康磊; 韩白玉; 蒋凯; 叶棋浓; 杜楠

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (03): 251-254.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006339

• 人Cdc25C基因
• 原核表达
• 纯化 GST-Cdc25C
• prokaryotic expression
• purification

目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Ros-sate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot方法检测融合蛋白表达,通过GSTpull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白Chk2的相互作用。结果:构建得到Cdc25C基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分...

• 单位
  北京大学第一医院; 中国人民解放军总医院; 中国人民解放军军事医学科学院