AVIL过表达载体构建及对GES-1细胞株增殖及迁移影响

作者：周婧媛; 吴慧洁; 刘爱群^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2019, 26(22): 1715-1736.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2019.22.10

• 胃癌
• AVIL
• 慢病毒
• 增殖

目的生物学分析显示AVIL基因表达与胃癌患者预后密切相关,本研究旨在探讨胃正常粘膜细胞AVIL基因过表达对其增殖迁移的影响,为进一步研究AVIL在胃癌中的作用机制提供参考。方法正常人胃黏膜上皮细胞GES-1购自中国科学院细胞库。采用PCR技术扩增目的基因,经酶切将目的基因转入GV358载体中,得到重组慢病毒载体,用PCR和测序对其进行鉴定后与慢病毒包装系统质粒共同转染293T细胞。用重组病毒颗粒感染GES-1细胞株,筛选过表达AVIL的细胞株。qRT-PCR检测稳转细胞AVIL mRNA的表达水平,CCK-8、划痕和Transwell迁移实验检测AVIL过表达后的细胞增殖迁移能力,统计数据以x-±s表示,多组间均数比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用t检验。结果测序结果显示,AVIL过表达慢病毒载体构建成功,GV358-AVIL重组病毒和GV358-NC病毒液浓度滴度是1×108 TU/mL,转染GES-1后荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白的表达。PCR结果显示,转染AVIL过表达组AVIL表达水平均明显增高,均P<0.001。GES-1-AVIL组24、48和72h增殖能力分别为(197.18±1.87)%、(297.91±3.62)%和(574.84±20.35)%,GES-1组分别为(150.48±11.28)%、(238.72±12.44)%和(349.45±16.70)%,GES-1-NC组分别为(160.59±3.92)%、(260.23±6.81)%和(386.88±9.96)%,GES-1-AVIL组和GES-1组、GES-1-NC组差异均有统计学意义,均P<0.05。GES-1-AVIL组细胞愈合率为(59.0±5.6)%,高于GES-1组的(20.3±1.5)%和GES-1-NC组的(17.6±4.1)%,P<0.001。GES-1-AVIL穿过上室的细胞数为81.0±4.0,高于GES-1组的39.7±7.0和GES-1-NC组的39.3±1.5,P<0.01。结论成功克隆、扩增AVIL基因,构建过表达AVIL慢病毒载体,该载体能稳定转染GES-1细胞株并对其增殖迁移有促进作用,为后续AVIL在胃癌细胞中的相关研究奠定基础。

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院