非洲猪瘟病毒p72蛋白N末端的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作者：姜林林; 宋帅; 蔡汝健; 蒋智勇; 李艳; 勾红潮; 楚品品; 李春玲^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(02): 144-152.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0038

• 非洲猪瘟病毒
• p72蛋白N末端
• 原核表达
• 间接ELISA

根据非洲猪瘟病毒Pig/HLJ/2018株p72-N末端基因的核苷酸序列,合成p72-N末端648 bp基因序列,连入pET-28a(+)载体进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定后,用重组蛋白p72-N末端作为包被抗原,建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法。结果显示,非洲猪瘟病毒p72-N末端648 bp基因片段成功克隆到pET-28a(+)载体中,经诱导表达获得约27 ku的重组蛋白,Western-blotting结果显示,重组蛋白与非洲猪瘟抗体阳性血清具有良好的反应原性。建立的ELISA方法结果显示,重组蛋白p72-N末端的最佳包被浓度为2.5μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:100,该方法特异性好,仅与非洲猪瘟抗体阳性猪血清发生特异性反应,敏感度可达1:1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%,与西班牙INGENASA公司非洲猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒符合率可达93.75%。结果表明,获得的重组蛋白p72-N末端具有良好的反应原性和免疫原性,建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。

• 单位
  广东省农业科学院动物卫生研究所; 农业部; 仲恺农业工程学院