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摘要
目的研究臭氧对慢性压迫性坐骨神经损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve, CCI)模型小鼠疼痛的影响, 探讨CCI模型小鼠脊髓Homer1b/c在此过程中的作用。方法按随机数字表法将62只雄性昆明小鼠分为8组(每组8只):假手术组(S1组)、注射纯氧对照组(S2组)、CCI术后第7天组(C1组)、CCI术后第13天组(C2组)、术后第7天注射臭氧组(O1组)、术后第7～13天注射臭氧组(O2组)、鞘内注射反义寡核苷酸组(AS组)、鞘内注射生理盐水对照组(NS组)。各组小鼠均选择左侧坐骨神经建立CCI模型, 术后7 d小鼠出现左后肢负重减少、挛缩等体征, 且无肢体瘫痪、自噬等现象视为建立模型成功。术后第7天开始观测机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdraw latency, TWL), Western blot法检测脊髓Homer1b/c和代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor, mGluR)5表达水平, 免疫荧光法检测Homer1b/c和mGluR5在脊髓的分布与表达。S1组只游离神经不结扎, 术后第7天观测MWT和TWL;S2组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 在术后第7天注射纯氧2、4、8、24 h后观测MWT;C1组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 术后第7天观测MWT和TWL, 其中MWT观测时间点同O1组;C2组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 术后第7～13天观测MWT和TWL;O1组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 在术后第7天注射臭氧, 观测注射后2、4、8、24 h的MWT和注射后2 h的TWL;O2组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 在术后第7～13天每天注射臭氧2 h后观测MWT;AS组行左侧坐骨神经结扎, 逐层缝合, 在术后第4天起鞘内注射Homer1b/c的反义寡核苷酸至第7天, 术后第4～9天观测MWT;NS组为AS组的生理盐水对照组, 与AS组相同时间点观测MWT。结果与S1组比较, C1和C2组小鼠MWT及TWL均降低(P<0.05);与C1组比较, O1组小鼠MWT升高(P<0.05), 而TWL差异无统计学意义(P>0.05);与C1组比较, O1组小鼠MWT在注射臭氧2、4 h后升高(P<0.05), S2组小鼠MWT差异无统计学意义(P>0.05);与C2组比较, O2组小鼠MWT升高(P<0.05);与NS组比较, AS组小鼠MWT在术后第8、9天显著升高(P<0.05)。与S1组比较, C2组和O2组小鼠Homer1b/c表达水平升高(P<0.05);与C2组比较, O2组小鼠Homer1b/c表达水平降低(P<0.05);S1组、C2组、O2组小鼠的mGluR5表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与S1组比较, NS组和AS组小鼠Homer1b/c表达水平升高(P<0.05);与NS组比较, AS组小鼠Homer1b/c表达水平降低(P<0.05)。与S1组比较, C1组小鼠Homer1b/c的表达增多;与C1组比较, O2组、AS组小鼠Homer1b/c表达减少;S1组、C1组、O2组和AS组小鼠的mGluR5表达未见明显差异。双重染色融合后, 与S1组比较, C1组小鼠Homer1b/c表达位置与mGluR5的位置相近;与C1组比较, O2组和AS组小鼠Homer1b/c表达位置与mGluR5相近的结果减少。结论臭氧可以抑制CCI模型小鼠的机械痛敏, 其机制可能是抑制Homer1b/c的产生, 减少与mGluR5的相互作用。
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