南海深海新颖低温脂肪酶的克隆、表达及酶学性质鉴定

作者：曹莹莹; 邓盾; 张云; 孙爱君; 夏方亮; 胡云峰

来源：中国生物工程杂志, 2016, 36(03): 43-52.

DOI：10.13523/j.cb.20160307

• 深海低温脂肪酶
• 金属离子耐受性
• 盐耐受性
• 有机溶剂耐受性
• 表面活性剂耐受性

从南海深海放线菌Pseudonocardia antitumoralis SCSIO 01299中克隆一个脂肪酶基因lipase B5。lipase B5基因片段大小为972bp,编码的蛋白质具有323个氨基酸残基并与Pseudonocardia sp.HH130629-09中假定脂肪酶有98%的同源性。以p ET28a(+)为载体,将重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中,实现lipase B5高效表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化lipase B5。Lipase B5最适反应底物为对硝基苯酚癸酸酯(p-NPD),最适温度为30℃,最适反应p H为7.5。Lipase B5催化p-NPD水解反应的活性达到140.14U/mg,Vmax和Km分别为109.8μmol/min、0.976mmol/L,催化橄榄油的活力为32.019 7U/mg。Lipase B5在p H7.5~8.5保持良好的p H稳定性;在10~20℃低温下保持较高的酶活力,在10~40℃内具有温度稳定性。Lipase B5对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Li+、Mg2+对该酶活性有促进作用。Lipase B5对高浓度的Na Cl有很好的耐受性,在100mmol/L的Na Cl存在下,酶活性大约保持在103%。Lipase B5对多种短链醇类有机溶剂和表面活性剂有很好的耐受性,Triton X-100、Tween-80和Tween-20对lipase B5酶有激活作用。

• 单位
  中国科学院大学; 中国科学院南海海洋研究所