摘要
目的建立表达氧化还原因子-1(Ref-1)小分子干扰RNA的重组逆转录病毒载体pmscv/siRef-1,观察人肝癌细胞株HepG2下调内源性Ref-1后对顺铂的敏感性变化。方法采用基因重组技术构建逆转录病毒载体pmscv/siRef-1。包装逆转录病毒,感染HepG2。RT-PCR及Western blot法检测感染后细胞内Ref-1 mRNA和蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞下调Ref-1表达后对顺铂的敏感性变化。结果pmscv/siRef-1能有效被包装并感染靶细胞,感染pmscv/siRef-1病毒的HepG2细胞Ref-1蛋白与mRNA表达量明显降低,细胞对顺铂敏感性显著增加(P<0.05)。结论成功构建以逆转录病毒为基础的抑制内源性Ref-1表达的RNA干扰载体;RNA干扰Ref-1基因可显著提高HepG2细胞对顺铂的敏感性。
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单位基础医学院; 九江学院