NETosis调控心肌细胞自噬促进小鼠急性心肌梗死的作用机制研究

作者：吴迦勒^*; 徐精彩; 周佳; 骆丽菊

来源：医学研究杂志, 2023, 52(11): 55-61.

• NETosis
• 急性心肌梗死
• 心肌细胞
• 自噬

目的 探究小鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)与中性粒细胞外陷阱相关死亡(neutrophil extracellular traps-osis, NETosis)调控心肌细胞自噬的相关性。方法 C57BL/6小鼠通过冠状动脉左前降支结扎法构建小鼠AMI模型。小鼠原代心肌细胞通过氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)处理构建心肌细胞损伤体外模型。PMA(NETosis诱导剂)/DNasⅠ(NETosis抑制剂)处理中性粒细胞，取上清液处理OGD诱导的心肌细胞，雷帕霉素(rapamycin, Rap)处理OGD诱导的心肌细胞。TTC染色检测心肌梗死面积；酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)检测血清cTnI水平；TUNEL染色检测细胞凋亡；ELISA检测中性粒细胞上清液中NETosis标志物水平，Western blot法检测相关蛋白表达水平。结果 TTC染色显示，与假手术组比较，模型组小鼠的心肌梗死面积显著增加，血清中cTnI水平显著升高(P<0.05),心肌细胞凋亡增多，Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平显著升高，p62蛋白表达水平显著降低。相较于对照组，OGD条件下细胞凋亡和cleaved caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组比较，PMA组中性粒细胞上清液中NETosis标志物MPO-DNA、MPO、NE水平显著升高；PMA+DNasⅠ组相较于单纯PMA处理组，心肌细胞凋亡水平显著下降；Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平显著降低，p62蛋白表达水平显著升高；相较于PMA+DNasⅠ组，Rap处理能够增强Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平，抑制p62水平(P<0.05),同时也显著逆转了由PMA+DNasⅠ诱导的细胞凋亡降低。结论 中性粒细胞NETosis可通过调控心肌细胞自噬促进小鼠AMI,可为AMI治疗药物的研发提供新的方向和理论依据。

• 单位
  杭州市中医院