通过式固相萃取柱净化-高效液相色谱-串联质谱法测定人全血中环孢素A和他克莫司的含量

作者：杨飞; 纪元; 王颖; 范子彦; 唐纲岭^*

来源：理化检验. B, 化学分册, 2022, 58(11): 1254-1259.

• 通过式固相萃取柱
• 高效液相色谱-串联质谱法
• 他克莫司
• 环孢素A
• 人全血

在200μL人全血样品中加入20μL混合内标溶液(环孢素A-d4和他克莫司-13C,d2质量浓度分别为5,0.5 mg·L-1),混匀后加入300 mmol·L-1硫酸锌溶液200μL,涡旋60 s。再加入600μL乙腈，涡旋120 s,静置5 min,离心10 min。分取上清液约1 mL,注入PRiME HLB通过式固相萃取柱，收集流出液，注入高效液相色谱仪，在InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(50 mm×4.6 mm, 2.7μm)上用不同体积比的含0.1%(体积分数，下同)甲酸的0.01 mol·L-1乙酸铵溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，所得目标物在串联质谱仪的电喷雾离子源正离子模式下电离、多反应监测模式下检测，以基质匹配法和内标法定量。结果显示：环孢素A和他克莫司工作曲线的线性范围分别为10～2 000μg·L-1和0.5～100μg·L-1,检出限分别为1.24,0.05μg·L-1;加标回收率分别为92.2%～106%和94.1%～108%,测定值的相对标准偏差(n=5)分别为2.9%～7.8%,4.7%～7.6%(日内精密度试验)和4.5%～6.7%,5.1%～8.2%(日间精密度试验);方法用于10个实际样品的分析，环孢素A和他克莫司的检出量分别为100.6～135.0μg·L-1和8.5～13.8μg·L-1。

• 单位
  山东省食品药品检验研究院; 国家烟草质量监督检验中心