大肠杆菌胞内L-丙氨酸响应型启动子的筛选与表征

作者：聂玉朋; 徐建中; 刘立明; 刘佳; 徐慧; 姜国政; 杨奕; 王深镖; 田延军^*

来源：中国酿造, 2023, 42(10): 39-44.

• 大肠杆菌
• L-丙氨酸
• 转录组测序
• 启动子

该研究通过对L-丙氨酸压力下大肠杆菌的转录组进行分析，利用mKate荧光蛋白进行表征，筛选响应L-丙氨酸的启动子元件。转录组筛选了ArgK、FlgG、GlgP、CpxP、BetA、GlpA、KdpB、PulG、LivH和YhfX十个在L-丙氨酸压力下转录水平显著提高的基因，并将基因前500 bp潜在的启动子片段与荧光报告蛋白基因m Kate融合，筛选得到特异性响应L-丙氨酸浓度的启动子PAla-7。结果表明，PAla-7启动子在10 g/L、20 g/L、30 g/L、40 g/L、50 g/L和60 g/L L-丙氨酸诱导后的相对荧光强度分别增加了49%、122%、181%、275%、432%和705%，表明PAla-7启动子在L-丙氨酸质量浓度0～60 g/L范围内有着良好的灵敏性。选择11种常见氨基酸诱导PAla-7启动子表达，只有L-丙氨酸在诱导质量浓度从10 g/L增加到20 g/L时，相对荧光强度增加了52.4%，表明PAla-7启动子是特异性响应L-丙氨酸的启动子。

• 单位
  齐鲁工业大学; 山东省食品发酵工业研究设计院; 工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 食品科学与技术国家重点实验室; 生物工程学院; 烟台恒源生物股份有限公司