人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

作者：蔡卫斌; 李朝阳; 杨中汉; 骆晓枫; 周世豪; 李民友; 刘祖国; 高国全

来源：中山大学学报(医学科学版), 2004, (03): 241-244.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2004.0065

• 纤溶酶原
• 突变型K5
• 血管增生抑制因子
• 突变
• 基因表达 plasminogen
• kringle 5
• angiogenic inhibitor
• mutation
• gene expression

【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b( )中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b( )/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2 -His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和West...

• 单位
  中山大学中山眼科中心; 中山大学