人源与鼠源神经生长因子信号肽引导β-内啡肽分泌表达的差异

作者：徐学武; 裴树俊; 缪雪蓉; 俞卫锋

来源：第二军医大学学报, 2009, 30(04): 378-382.

• 信号肽
• 神经生长因子
• β-内啡肽
• 分泌性表达

目的:考察人源神经生长因子信号肽序列是否具有介导β-内啡肽分泌性表达的作用,以及人源与鼠源神经生长因子信号肽的作用效率是否存在差异。方法:构建2个分别利用人或鼠的信号序列介导β-内啡肽分泌表达的真核表达载体pcD-NA3.1-hEP和pcDNA3.1-mEP;脂质体法转染NIH3T3细胞,转染48 h后分别收集细胞培养上清液、细胞,以及细胞呈单层生长的盖玻片。收集的上清液用RIA法测定β-内啡肽的浓度;收集的细胞提取总RNA,一步法RT-PCR检测融合基因的mR-NA的转录;长有细胞的盖玻片处理后进行细胞免疫荧光染色。结果:RT-PCR的结果显示,所构建的融合基因在NIH3T3细胞内发生了表达,β-内啡肽主要分布在NIH3T3细胞的胞质内。pcDNA3.1-hEP和pcDNA3.1-mEP分别转染NIH3T3细胞48 h后,细胞培养上清β-内啡肽的浓度分别是(280.33±24.16)pg/ml和(191.04±7.96)pg/ml,有显著的统计学差异(P<0.05),且与空白对照之间均有显著的统计学差异(P<0.01)。结论:人源神经生长因子信号肽序列能够介导β-内啡肽蛋白的分泌性表达,且作用效率要优于鼠源信号肽。

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学