携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定

作者：杨华安; 张扬; 杨钰兴; 胡溯; 苟欣

来源：重庆医学, 2015, 44(27): 3803-3807.

• 信号转导子及转录激活子3
• 慢病毒载体

目的构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总RNA通过STAT3引物逆转录为cDNA PCR扩增、回收后,同pLVX-IRES-ZsGreen1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293T细胞,48h后收集细胞,Western blot检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实STAT3成功插入pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293T细胞48h,Western blot检测STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆市渝北区人民医院