四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织和HSC-T6细胞NOX4基因及其蛋白表达的变化

作者：彭婕; 李弼民; 雷宇鹏

来源：实用肝脏病杂志, 2021, 24(03): 319-322.

• 肝纤维化
• HSC-T6细胞
• 还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶家族氧化酶4
• GF-β/Smad信号通路
• 小鼠

目的探讨四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化小鼠和肝星状细胞(HSC-T6)还原型辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶家族氧化酶4(NOX4)基因及其蛋白表达的变化。方法采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)构建10只小鼠肝纤维化模型,采用q RT-PCR法和Western Blot法检测小鼠肝组织NOX4基因和蛋白表达水平。将肝星状细胞(HSCT6)分为对照组、无意干预组和NOX4-si RNA干预组,后两组分别采用脂质体2000将无意义序列或NOX4-si RNA转染HSC-T6细胞,采用q RT-PCR法和Western Blot法检测HSC-T6细胞NOX4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col1a I)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2和Smad3水平,采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)含量,采用MTT法检测细胞增殖,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果模型小鼠肝组织出现明显的病理学损伤,有大量的胶原纤维沉积;模型组小鼠肝组织NOX4 m RNA水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组细胞比,NOX4-si RNA干预组细胞NOX4 m RNA及其蛋白、ROS、增殖活性、S期细胞比例、α-SMA、Col1a I、TIMP-1、MMP-2、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3表达水平显著降低,而G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论肝纤维化组织NOX4呈高水平,下调NOX4可抑制肝星状细胞的增殖和活化,并促进其凋亡,可能是通过下调TGF-β/Smad信号通路实现的。

• 单位
  南昌大学第一附属医院