线粒体自噬受体Nix蛋白的原核表达及其纯化

作者：熊英环; 林千文; 吴湘涛; 张星亮

来源：广东医学院学报, 2015, 33(04): 394-402.

• 线粒体自噬受体Nix
• 载体构建
• 亲和层析
• 凝胶过滤层析

目的获得可用于蛋白晶体筛选的高纯度及构象均一的Nix蛋白。方法将Nix截断基因构建到原核载体并转化大肠杆菌。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后通过GST柱亲和纯化目标蛋白。TEV酶切除GST标签后采用凝胶过滤层析进一步纯化。结果 Nix截断基因成功构建到p GEX-4T-2并诱导表达了目标蛋白。通过GST亲和层析得到了可溶性的携带GST标签的Nix(2135)蛋白。切除GST标签的Nix(2135)通过凝胶过滤层析得到了构象均一的单体蛋白。结论采用原核表达、亲和层析和凝胶过滤层析可获得纯度高且构象均一的单体Nix蛋白。

• 单位
  广东医学院附属医院