冷冻治疗对胶质瘤细胞凋亡影响的实验研究

作者：刘天助; 卢凤飞; 潘俊; 殷志林; 张世忠

来源：中华神经医学杂志, 2015, 14(08): 794-798.

• 冷冻治疗
• 冷冻释放物
• 神经胶质瘤
• 凋亡

目的探讨冷冻治疗诱发肿瘤细胞凋亡的原因。方法 (1)将GL261胶质瘤细胞(1×107个/10μL)注入C57小鼠背部皮下,建立荷瘤小鼠模型,肿瘤直径达1520 mm时将小鼠按随机数字表法分为冷冻治疗组(n=17)和假手术组(n=15),前者行冷冻手术治疗,后者只插入冷冻刀但不进行冷冻操作。术后2 h提取冷冻肿瘤组织释放物;术后12 h、24 h TUNEL染色检测肿瘤组织凋亡情况;术后24 h Western blotting实验检测肿瘤组织前体(pro)-Caspase-8、pro-Caspase-8、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达。(2)将GL261胶质瘤细胞分为冷冻释放物组、对照组,分别加入1倍浓度的冷冻释放物和等量DMEM,培养12 h后TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞上述凋亡相关蛋白的表达。结果 (1)TUNEL染色显示术后12 h冷冻治疗组小鼠胶质瘤组织切片S1区呈均一性坏死,S2区出现明显凋亡带(早发凋亡),术后24 h S1区呈均一性坏死,S2区凋亡消退,S3区近靶区侧出现一新发凋亡带(迟发凋亡)。Western blotting检测显示,冷冻治疗组小鼠肿瘤组织S2区pro-Caspase-9和PARP蛋白的表达明显少于S1、S3、S4区,S3区pro-Caspase-8的表达低于S1、S2、S4区,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)TUNEL染色显示,与对照组比较,冷冻释放物组GL261胶质瘤细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测显示,与对照组相比,冷冻释放物组细胞pro-Caspase-8、pro-Caspase-9表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论冷冻治疗后肿瘤组织释放物具有诱发胶质瘤细胞凋亡的作用。

• 单位
  广东省脑功能修复与再生重点实验室; 中山市人民医院; 南方医科大学珠江医院