环状RNA BRAF＿2在子痫前期胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制

作者：张玉月; 朱亚飞; 高丽娜; 殷荷; 马朝霞; 吴玉珠; 王艳华; 吴凯; 张慧萍

来源：解放军医学杂志, 2022, 1-16.

• 子痫前期
• circRNA
• 增殖
• 凋亡
• miRNAs

目的　探讨环状RNA BRAF＿2（circRNA BRAF＿2）在子痫前期（PE）胎盘滋养细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法　收集2018年1月—2019年2月宁夏医科大学总医院正常妊娠与PE孕妇的胎盘组织（n=21），采用qRT-PCR检测两组胎盘组织中circRNA BRAF＿2的表达水平，并分析circRNA BRAF＿2表达水平与血压的相关性。体外培养人源胎盘滋养细胞株（HTR8-S/Vneo），（1）将细胞分为对照组与缺氧组，采用qRT-PCR检测两组中circRNA BRAF＿2的表达；（2）在HTR8-S/Vneo中转染circRNA BRAF＿2慢病毒空载体和过表达慢病毒，分为对照组，circRNA BRAF＿2阴性对照组与circRNA BRAF＿2过表达组，使用qRT-PCR对circRNA BRAF＿2进行过表达验证；（3）在circRNA BRAF＿2过表达慢病毒转染成功的基础上，将细胞分为6组：对照组、circRNA BRAF＿2阴性对照组、circRNA BRAF＿2过表达组、缺氧组、缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组、缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组，采用EdU和CCK-8法检测各组的增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平变化，Western blotting检测各组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达水平。采用qRT-PCR检测circRNA BRAF＿2在HTR8-S/Vneo细胞质和细胞核中的表达水平，通过生物信息学分析筛选出与circRNA BRAF＿2可能结合的miRNA并检测其在组织和细胞中的表达水平。结果　与正常妊娠组比较，在PE组胎盘组织中的circRNA BRAF＿2表达水平明显降低（P＜0.001），且circRNA BRAF＿2表达水平与收缩压、舒张压呈负相关（收缩压：r=-0.4531，P＜0.01；舒张压：r=-0.4381，P＜0.01）。qRT-PCR检测结果显示，与对照组比较，缺氧组circRNA BRAF＿2表达水平明显降低（P＜0.01）。qRT-PCR检测结果显示，circRNA BRAF＿2阴性对照组相对表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，circRNA BRAF＿2过表达组circRNA BRAF＿2表达水平明显升高（P＜0.001）。EdU及CCK-8法检测结果显示，与对照组比较，缺氧组EdU阳性细胞百分比明显下降（P＜0.001），滋养细胞增殖能力降低（P＜0.001）；与缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组滋养细胞EdU阳性细胞百分比明显升高（P＜0.001），滋养细胞增殖能力明显增强（P＜0.001）。流式细胞术检测结果显示，与对照组比较，缺氧组细胞凋亡率明显增高（P＜0.001）；与缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组细胞凋亡率明显降低（P＜0.001）。Western blotting检测结果显示，与对照组比较，缺氧组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白相对表达量升高（P＜0.01或P＜0.001），Bcl-2蛋白相对表达量降低（P＜0.01）；与缺氧+circRNA BRAF＿2阴性对照组比较，缺氧+circRNA BRAF＿2过表达组caspase-3、caspase-9及Bax蛋白相对表达量降低（P＜0.001或P＜0.01），Bcl-2蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。qRT-PCR检测结果显示，circRNA BRAF＿2主要在细胞质中表达，生物信息学分析结果显示，circRNA BRAF＿2与miR-7855-5P存在结合位点。qRT-PCR检测结果显示，与正常妊娠组比较，miR-7855-5P在PE胎盘组织中高表达（P＜0.05）；与对照组细胞比较，缺氧组miR-7855-5P明显高表达（P＜0.001）。结论　circRNA BRAF＿2可促进PE胎盘滋养细胞增殖并抑制其凋亡，作用机制可能与miR-7855-5P有关。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学; 基础医学院