黑素细胞中PINK1的表达及在氧化损伤中的作用

作者：王利娟; 李真; 丁晓岚; 王芳; 李曼; 徐前喜; 张艳坤; 张建中; 杜娟^*

来源：中国皮肤性病学杂志, 2018, 32(09): 985-990.

DOI：10.13735/j.cjdv.1001-7089.201801020

• PINK1
• PIG1黑素细胞
• 白癜风
• 氧化损伤
• H2O2

目的明确正常人黑素细胞PIG1中PINK1的表达,探讨PINK1在黑素细胞氧化损伤中的作用。方法 (1)采用逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)及免疫印迹法(WB),检测PIG1黑素细胞中PINK1的mRNA及蛋白的表达水平;(2)不同浓度H2O2处理PIG1细胞24h,CCK-8法测定细胞增殖活力,确定H2O2最适浓度;(3)设计并合成3对PINK1干扰片段(siRNA)转染PIG1细胞,采用RT-qPCR法筛选干扰效率最高的siRNA;(4)实验分组:对照组、Mock组、NC组、转染组。细胞转染48h后,再加入H2O2处理24h,观察各组细胞形态,CCK-8法测定细胞增殖活力。结果 (1)在PIG1黑素细胞中检测到PINK1 mRNA及蛋白的表达;(2)黑素细胞增殖活力呈H2O2浓度依赖性降低,0.6mmol/L H2O2组降低至(49.02±2.40)%,接近IC50,故以此浓度作用24h建立氧化损伤模型;(3)与Mock组相比,PINK1-siRNA3转染48h干扰效率最高(>90%);(4)与对照组相比,PINK1-siRNA3转染组树突回缩及变圆悬浮的细胞明显增多,转染组细胞增殖活力明显降低(P<0.01)。结论本研究首次明确了PINK1在正常人黑素细胞中的表达,下调PINK1可加重H2O2所致的黑素细胞形态学改变及活力降低,表明PINK1对黑素细胞具有一定的保护性作用。

• 单位
  北京大学人民医院