用p[Tj(a-)]外周血淋巴细胞建立抗-PP1Pk杂交瘤细胞株

作者：郭忠慧^*; 朱自严^*; 向东; 赵俸涌; 杨颖

来源：中国输血杂志, 2023, 36(04): 294-298.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2023.04.004

• p[Tj(a-)]
• k" name="keyword">抗-PP1Pk
• a" name="keyword">抗-Tja
• 杂交瘤技术
• 人单克隆抗体

目的 建立分泌抗-PP1Pk(又称抗-Tja)的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line, LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法 无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMC),用EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)转化单个核细胞中的B淋巴细胞，使其增殖形成B淋巴母细胞样细胞克隆。用菠萝酶处理的正常AB型和O型红细胞以及p[Tj(a-)]红细胞筛选培养上清，通过显微吸引分离技术获得分泌特异性抗-PP1Pk的LCL,与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合。异源杂交瘤细胞经次黄嘌呤(H)-氨基蝶呤(A)-胸腺嘧啶(T)-脱氧胞嘧啶核苷(D)-毒毛旋花苷(O)即HOTD培养基选择性培养、抗体筛选以及有限稀释亚克隆，建立分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株。结果 从O型p[Tj(a-)]献血者外周血B淋巴细胞EBV转化细胞培养上清中，初筛得到与正常红细胞全部凝集，与p[Tj(a-)]红细胞不凝集的单个淋巴母细胞样克隆5E1-E5,初步鉴定培养上清具有抗-PP1Pk特异性。随后利用杂交瘤技术，将5E1-E5细胞与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合，建立了持续稳定分泌IgM抗-PP1Pk的单克隆杂交瘤细胞株。结论 本研究通过EBV转化和杂交瘤技术建立了分泌抗-PP1Pk的人单克隆细胞株，这项工作使大规模筛选稀有p[Tj(a-)]血型成为可能，对我国稀有血型库的建设具有重要意义。

• 单位
  上海市血液中心