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摘要
L-谷氨酸氧化酶（L-glutamate oxidase,LGOX）能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸（α-ketoglutaric acid,α-KG），在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值。为了提高LGOX的活性，本文结合生物信息学方法和显色法，筛选得到一种新型的含有LGOX基因的茂源链霉菌株（Streptomyces mobaraensis CGMCC 4.1719），以其基因组序列为模板，通过PCR技术扩增LGOX基因，与pET21b质粒连接，构建表达载体pET21b-SmLGOX，化转至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达，并对诱导条件加以优选。通过电泳分析结果可知，SmLGOX基因在大肠杆菌中成功表达。确定了最佳诱导条件为：IPTG终浓度0.4 mmol/L,30℃下诱导6 h。纯化后在不同pH条件下测定酶活，该重组菌最适pH为6.0，且在pH=4.0～6.0时相对酶活保持在80%以上，稳定性好，适于LGOX的工业化应用。
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