白纹伊蚊自噬基因ATG8蛋白多克隆抗体的制备及应用

作者：何珊; 肖秋秋; 石梦婷; 李威仪; 彭哲慧; 程金芝; 吴家红^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(07): 787-792.

DOI：10.13350/j.cjpb.230708

• 白纹伊蚊
• 自噬相关蛋白8/ATG8
• 原核表达
• 抗体制备

目的 通过原核表达系统制备白纹伊蚊(Aedes albopictus,Aa)ATG8,免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体，并验证抗体的实用性。方法 从白纹伊蚊Aa23细胞中提取cDNA,通过PCR扩增AaATG8基因片段，然后与载体pET30a连接，构建原核表达载体pET30a-AaATG8并转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞，挑取单克隆进行PCR鉴定，提取质粒进行测序鉴定。再将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞，用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白rAa-ATG8,纯化透析后免疫Balb/c小鼠，制备多克隆抗体，采用ELISA检测抗体效价，并以该抗体为一抗采用Western blot检测不同物种ATG8蛋白的表达。结果 成功构建原核表达载体PET30a-AaATG8并在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白。重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠，ELISA检测其血清抗体效价为1∶640 000;Western blot显示rAa-ATG8多克隆抗体可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白，反应条带位于18、16或14 ku处。结论 成功获得高效价的rAa-ATG8多克隆抗体，该抗体不仅可用于检测白纹伊蚊ATG8蛋白，还可用于检测埃及伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、三带喙库蚊、家蝇ATG8蛋白，为研究自噬在蚊虫以及其他物种中的作用奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学; 安顺市人民医院