改良的环介导等温扩增技术在羊布鲁菌病快速诊断中的应用

作者：于广江; 张可欣; 郭文平; 刘金霞^*; 郭亚春^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-8.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230407.002

• 羊布鲁氏菌病
• 环介导等温扩增技术
• 特异性诊断
• 试剂盒

布鲁菌病严重威胁人类健康和畜牧业生产的常见人畜共患病。建立改良的LAMP，对防控布鲁菌病的传播具有重要意义。选择羊布鲁菌标准菌株DNA保守序列，设计LAMP引物；建立并优化LAMP快速检测体系；通过倍比稀释法等完成灵敏度和特异性实验；选择可疑布鲁菌感染羊血液样本200例，分别进行LAMP、PCR和RBPT检测，完成一致性检验。结果发现，LAMP反应体系中MgSO4为8 mmol/L，甜菜碱为0.8 mmol/L，钙黄绿素为5 mmol/L，MnCl2为10 mmol/L；布鲁菌均呈现绿色，5种阴性菌株均为橙色；随着模板稀释度的逐渐增大，扩增开始时间逐渐延长，检测极限为10 copies/μL，与凝胶电泳、PCR结果一致；与PCR比较，羊血液标本LAMP阳性率基本一致，无统计学差异(P>0.05)，与RBPT比较，LAMP阳性率显著升高，有统计学差异(P<0.05)，PCR和LAMP检测一致性较好(Kappa=0.987，P>0.7)。因此，本研究为布鲁菌病提供了特异性好，灵敏度高检测试剂盒。

• 单位
  承德医学院