RNA内切酶CPSF3受E3D泛素连接酶UBE3D调控

作者：鲁月; 罗婧; 颜璐; 吴宇; 郑煜芳^*

来源：复旦学报(自然科学版), 2022, 61(01): 43-51.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2022.01.013

• 泛素化
• E3D泛素连接酶
• 切割与聚腺苷酸化特异因子3
• 酵母双杂交
• 免疫共沉淀

泛素化是泛素分子在系列特殊酶作用下，对靶蛋白进行特异性修饰的过程，该过程参与细胞周期、基因表达、信号传递等几乎一切生命活动的调控，近年来成为开发新药物的新靶点。泛素化研究中，确定E3泛素连接酶和其特异性底物之间的作用是研究的重点和难点，探索底物蛋白翻译后修饰命运，对于研究E3泛素酶的修饰类型具有指示性的作用。E3D泛素连接酶基因(UBE3D)在人和小鼠中相对保守，小鼠中UBE3D纯合敲除致死，提示UBE3D在胚胎发育过程中具有重要作用。本文选用了酵母双杂交(Y2H)、亲和纯化质谱(AP-MS)及免疫共沉淀(Co-IP)3种方法，筛选出了UBE3D的候选底物切割与聚腺苷酸化因子3(CPSF3).研究中发现，过表达UBE3D可以显著上调CPSF3的蛋白表达水平，敲低UBE3D可以显著下调CPSF3蛋白的表达水平，揭示UBE3D具有稳定CPSF3的作用。细胞外源泛素化实验表明，过表达UBE3D不会改变CPSF3的蛋白泛素化水平，提示UBE3D对CPSF3的泛素化修饰可能不同于常规E3泛素连接酶。CPSF3是一种核酸内切酶，对于mRNA的成熟和基因表达至关重要。因此，UBE3D可能通过稳定CPSF3对胚胎发育起到重要作用。

• 单位
  生命科学学院; 复旦大学; 复旦大学附属妇产科医院