"中国病原分枝杆菌质谱数据库"构建及验证

作者：杨本善; 李修远; 刘东鑫; 李亚楠; 王玫; 赵雁林; 鲁辛辛

来源：中华检验医学杂志, 2018, 41(07): 519-526.

• 分枝杆菌科
• 光谱法,质量,基质辅助激光解吸电离
• 数据库
• 质量控制

目的构建国产基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪的病原分枝杆菌鉴定数据库,评价其鉴定准确性并与国外同类产品比较。方法 "中国病原分枝杆菌质谱数据库"的构建:收集分枝杆菌国际标准菌株19种、19株及"资源化"分枝杆菌临床分离株42种、183株;采用改良研磨-超声裂解法提取菌体蛋白。以国产MALDI-TOF MS仪(microTyper MS)为基础进行谱图采集及数据库构建,每株菌提取物平行滴加于12个靶点,每个靶点采集2次,得到24张质谱图;后按标准精选20张优质谱图,设置最大出峰数目、最小出峰频率及质量容差,经分析软件生成主谱图(MSP)。数据库验证:收集不同地区来源分枝杆菌305株,以16S rRNA基因、hsp65及rpoB测序为金标准,比较以本数据库为基础的microTyper MS与以Mycobacteria Library 3.0数据库为基础的进口MALDI-TOF MS仪(MALDI-TOF MS Microflex)鉴定分枝杆菌的准确性及谱图特征。结果构建的"中国病原分枝杆菌质谱数据库"容量为42种、202株,平均每种纳入菌株4.8株,排在前10位的是堪萨斯分枝杆菌16株、胞内分枝杆菌16株、戈登分枝杆菌16株、偶发分枝杆菌16株、鸟分枝杆菌16株、脓肿分枝杆菌16株、结核分枝杆菌15株、马赛分枝杆菌11株、阿罗普研院分枝杆菌10株及yongongens分枝杆菌2株;305株验证菌株经测序确认为29种;基于本数据库,种水平鉴定准确率为99.67%(304/305),高于MALDI-TOF MS Microflex(97.38%,297/305),差异有统计学意义(χ2=4.06,P<0.05)。结论构建的"中国病原分枝杆菌质谱数据库"质量达到临床常规应用要求,就国内流行株而言,鉴定准确率优于国外同类产品。(中华检验医学杂志,2018, 41:519-526)

• 单位
  中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心; 首都医科大学附属北京同仁医院