提升上清液Wnt3a蛋白含量的L-Wnt3a细胞培养体系及其促进多能干细胞诱导黑素细胞分化的效应研究

作者：曲勃维; 刘莉萍; 鲁浩; 李遇梅^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2022, 32(06): 497-503.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y220062

• 黑素细胞
• 多能干细胞
• Wnt3a蛋白
• 诱导多能干细胞
• 细胞分化
• 拟胚体

目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度，验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3a来源的作用。方法:通过观察L-Wnt3a细胞的生长特性及其分泌Wnt3a蛋白量特点，设定收集条件培养基的参数，使用ELISA法对收集到的条件培养基进行Wnt3a蛋白浓度的标定，配制出明确Wnt3a浓度的黑素细胞分化培养基，对胚胎干细胞株WA09及诱导多能干细胞株WTC-11细胞进行黑素细胞的悬浮诱导分化，对获得的诱导黑素细胞进行黑素相关基因表达检测及Masson-Fontana染色等相关验证。结果:优化后的L-Wnt3a条件培养基收集体系能够稳定高效获取Wnt3a蛋白，明确Wnt3a浓度的分化体系能够使WA09和WTC-11成功诱导黑素细胞，使用相应浓度的Wnt3a重组蛋白也能够达到相似的效果。结论:通过优化收集方案能够高效获得明确浓度的L-Wnt3a条件培养基，将其应用于明确Wnt3a浓度的培养体系能够成功诱导多能干细胞分化为功能性黑素细胞。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院; 江苏大学附属医院