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摘要
为建立一套稳定高效的槟榔叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化方法，本研究采用酶解法以槟榔嫩花苞、嫩叶片、胚状体为实验材料，对影响其原生质体产率、活力及瞬时转化效率的因素进行了研究。结果表明：槟榔花苞在酶解4 h产量和活力最高，产量为9.1×107个/mL，活力为92%。槟榔原生质体瞬时转化中原生质体/质粒与40%PEG-4000水浴(45℃) 30 min、室温PEG孵育40 min的条件下，利用PEG介导法将表达绿色荧光蛋白的质粒P35-EGFP转入槟榔原生质体中，转化效率达到13%。通过共聚焦显微镜观察和荧光定量分析证明，EGFP与MYB108都成功被过表达。该研究建立了槟榔叶肉原生质体的分离及瞬时转化方法，有较好的应用价值。可以用作蛋白质亚细胞定位和基因调控作用的研究，后续还可以被用作验证蛋白质与蛋白质或蛋白质与DNA的互作等研究。
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