FOXO1对急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道的调控作用及其机制

作者：何婧; 王导新; 邓旺^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2020, 46(06): 1155-1347.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20200608

• 叉头框蛋白O1
• 上皮细胞钠离子通道
• 胰岛素
• 急性肺损伤
• 急性呼吸窘迫综合征

目的:探讨叉头框蛋白O1 (FOXO1)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道(ENaC)的调控作用,并阐明其可能的作用机制。方法 :20只C57BL/6J小鼠随机分为对照组和LPS组,每组10只。经相应处理后分别留取标本,HE染色观察2组小鼠肺组织病理形态表现,RT-PCR和Western blotting法检测2组小鼠肺组织中α亚基ΕΝαC (αENaC) mRNA表达水平及磷酸化FOXO1 (pFOXO1)表达水平。培养肺泡上皮A549细胞,分别进行基因干预,使A549细胞过表达或沉默FOXO1基因,RT-PCR法检测αENaC mRNA表达水平。A549细胞分为对照组、胰岛素组、胰岛素+PI3K抑制剂组和胰岛素+AKT抑制剂组,分别干预后收集细胞,Western blotting法检测各组A549细胞中pFOXO1 (Ser256)蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组A549细胞中αENaC mRNA表达水平,免疫荧光法检测FOXO1在细胞中的定位情况。结果:与对照组比较,LPS组小鼠肺组织病理评分明显升高(P<0.05),肺组织中pFOXO1 (Ser256)和αENaC蛋白表达水平降低(P<0.05),二者呈正相关关系(r=0.703, P<0.05);与对照组比较,过表达FOXO1组A549细胞中αENaC mRNA表达水平降低(P<0.05),沉默FOXO1组αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,胰岛素组A549细胞中pFOXO1 (Ser256)蛋白和αENaC mRNA表达水平升高(P<0.05),pFOXO1主要分布于细胞质中,而胰岛素+PI3K抑制剂和胰岛素+AKT抑制剂组A549细胞中αENaC mRNA和pFOXO1蛋白表达水平低于胰岛素组P<0.05)。结论:FOXO1磷酸化失活后由细胞核穿梭至细胞浆,对αENaC的抑制作用减弱,从而上调αENaC表达。

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院