内皮祖细胞培养上清对高氧暴露新生大鼠肺结构的改善作用

作者：李志; 陆爱珍; 张小媚; 钱莉玲

来源：中国病理生理杂志, 2017, 33(08): 1467-1474.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2017.08.020

• 高氧
• 内皮祖细胞
• 肺损伤
• 旁分泌

目的:研究内皮祖细胞培养上清(endothelial progenitor cell-conditioned medium,EPC-CM)对高氧暴露新生大鼠肺损伤时肺泡结构的改善作用及其机制。方法:从新生SD大鼠骨髓中获取内皮祖细胞并鉴定,收集第3代细胞的培养上清备用。另取新生SD大鼠40只随机分为4组,即空气组:仔鼠在空气(21%O2)中喂养21天;高氧组:仔鼠在85% O2中喂养21天;内皮细胞基础培养基(endothelial cell basal medium,EBM)干预组:仔鼠在85%O2中喂养至第14天时,经气道给予100μL EBM,然后喂养至第21天;EPC-CM干预组:仔鼠在85% O2中喂养至第14天,经气道给予100μL EPC-CM,喂养至第21天。第21天处死小鼠,左肺用4%多聚甲醛固定,留作石蜡切片,随后HE染色进行肺组织病理形态学观察,并做辐射状肺泡计数(radical alveolar count,RAC)及肺泡平均线性截距(mean linear intercept,MLI)测量;免疫组织化学方法对血管内皮细胞FVIII染色,计数肺组织微血管密度;右肺留作实时荧光定量PCR检测肺组织KGF、VEGF、SP-A和SP-C的mRNA表达。结果:培养所得细胞具有典型的EPCs形态改变,能结合异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素1并摄取Di I荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白。高氧组及EBM干预组的仔鼠体重、RAC、MLI和微血管密度较空气组显著降低(P<0.05),EPC-CM干预组的RAC和微血管密度较高氧组和EBM干预组明显增加(P<0.05),而体重和MLI的变化无明显差异,但有增高的趋势。高氧组和EBM干预组肺组织KGF、VEGF、SP-A和SP-C的mRNA表达较空气组显著降低(P<0.05),EPC-CM干预组的表达显著高于高氧组和EBM干预组(P<0.05)。结论:EPC-CM可改善高氧暴露新生大鼠的肺泡化和肺血管发育,可能与促进肺内KGF和VEGF mRNA的表达相关。

• 单位
  复旦大学附属儿科医院