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摘要
目的利用响应面法对肝素亲和层析在人凝血因子Ⅸ纯化中的纯化条件进行优化,确立最佳层析工艺参数。方法通过单因素试验分析上样温度对纯化效果的影响,三因素三水平响应面法优化层析洗脱条件,福林酚法和一期凝固法分别测定总蛋白含量和人凝血因子Ⅸ效价,以比活性指标以及工艺回收率评价层析纯化效果。结果优化的最佳层析条件为5℃上样,洗涤4 CV,洗脱液配方枸橼酸钠20 mmol/L、盐酸精氨酸18.7 mmol/L、NaCl 611.6 mmol/L、pH7.5;在此最佳层析参数条件下工艺回收率为(46.6±2.9)%,人凝血因子Ⅸ效价达到(68.4±4.7) IU/mL,比活性(62.8±3.3) IU/mg。结论经本研究优化的肝素亲和层析工艺参数可对人凝血因子Ⅸ的纯化起到很好的指引作用。
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